选择内参基因的标准:
1. 高度或中度表达,排除太高或太低
2. 表达水平不受任何外源因素影响
3. 不存在假基因
由于时空的变化,RNA的表达水平并不恒定的,细胞周期的不同阶段内以及不同类型的细胞或组织都可能存在差异。因此需要根据实际研究的细胞和组织类型以及实验要求,从多种内参基因中筛选出适合自己实验的稳定表达的内参基因,同时也可以选择多内参基因的研究方法,设置两个或两个以上的内参基因,取均值后校正目的基因,从而得到更可靠的结果。
如果与前人研究的物种相同,可直接利用文献中选择的内参基因;如果没有已知可用的内参基因,可用选择多个管家基因进行内参基因的筛选与验证,一般的流程是:
1. 选择多个候选的内参基因
2. 针对这些基因进行实时荧光定量PCR
3. 分析这些内参基因的表达稳定性以及变异系数等
4. 确定最优内参基因进行后续实验
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