重组蛋白制备的基本步骤有哪些?

重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。

重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。

 

为了产生重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。产生重组蛋白需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。

 

获取重组蛋白的基本步骤:

1.目标基因的扩增。

2.插入克隆载体。

3.亚克隆到表达载体中。

4.转化到蛋白表达宿主(细菌(大肠杆菌)、酵母、哺乳动物细胞或杆状病毒-昆虫细胞系统)。

5.重组蛋白的鉴定试验。(western blot 或荧光)

6.大规模生产。(大型发酵罐)

7.分离和纯化。

 

重组蛋白技术:

 

重组蛋白是大规模生产的临床相关蛋白。靶蛋白的基因被克隆到载体上,并在模式生物中表达为蛋白。重组蛋白的生产需要重组基因技术、蛋白表达与纯化技术等一系统技术。义翘神州拥有多年生产6000个重组蛋白的经验,提供专业的重组蛋白服务。

 

• DNA分离和纯化:可以首先通过去除细胞壁和细胞膜成分来分离DNA。接下来,通过苯酚去除蛋白。最后,通过核糖核酸酶去除RNA。

• 蛋白表达:在哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母和细菌中选择合适的载体和最佳的表达系统,对于避免蛋白过量产生的毒性作用、确保蛋白正确折叠、提高蛋白稳定性、促进蛋白分泌具有重要意义。必须针对每个重组蛋白进行评估,以确定哪种系统可以发挥最佳效果。

• 蛋白纯化:蛋白纯化的目的是将靶蛋白从细胞裂解液的所有组分中分离出来,同时仍然保留蛋白的生物活性和化学完整性。蛋白的分离纯化是一项艰巨而繁重的任务,需要根据蛋白的特性选择合适的纯化方法,以提高所得蛋白产物的纯度。

 

更多详情可以参看:重组蛋白 https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review

  • 发表于 2023-08-11 15:05
  • 阅读 ( 1062 )
  • 分类:其他

你可能感兴趣的文章

相关问题

0 条评论

请先 登录 后评论
xiaoqin2023
xiaoqin2023

32 篇文章

作家榜 »

  1. omicsgene 700 文章
  2. 安生水 348 文章
  3. Daitoue 167 文章
  4. 生物女学霸 120 文章
  5. xun 82 文章
  6. 红橙子 78 文章
  7. rzx 75 文章
  8. CORNERSTONE 72 文章