全能核酸酶SuperNucleaseFAQ详解:解开核酸酶的神秘面纱

义翘神州提供不同级别全能核酸酶,GMP级条件下生产的全能核酸酶SuperNuclease,无动物源性,可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性,应用场景广泛且使用量低不易残留,质量、性能、供货能力可靠,并已完成在FDA的药物主文件申报备案(DMF Number#:35978),满足药物申报的规范。

全能核酸酶(SuperNuclease)是一种来自于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的DNA和RNA,完全将核酸降解成3~5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶,依托于ISO 13485和GMP体系,还可提供高效、高质量、应用广的GMP级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒,在解决生物制品核酸污染的同时,有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶:

Q: 如何处理粘附细胞?

A: 用PBS洗涤后,向100µL RIPA裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)中加入1-5µL全能核酸酶,在室温下孵育30min,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。

 

Q: 如何处理悬浮细胞?

A: 离心收集悬浮细胞后,将100µL RIPA裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)加入含有1-5µL全能核酸酶的离心管中,在室温下孵育30min,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。

 

Q:  如何处组织样本呢?

A: 研磨30~100mg动植物组织后,加入100~200µL裂解液和1~5µL全能核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液并离心上清液进行下游实验。

 

Q: 大肠杆菌或其他细菌呢?

A: 离心收集细菌后,裂解液或研磨破碎后,每100µL加入1~5µL全能核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液,离心上清液进行下游实验。

 

Q: 如何稀释

A: 正常推荐稀释比(终浓度)为1:1000~1:20000,其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。

 

Q: 是否用PBS稀释

A: 是

 

Q: 你能减少剂量吗

A: 如果你想减少剂量,可以适当提高反应温度或延长反应时间

 

Q: 反应辅因子

A: 必须向反应溶液中加入2-5mM Mg2+

 

Q: 反应缓冲液

A: 常用的生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等

 

Q: 稀释后每次使用多少?如何测试梯度?一开始多少钱?

A: 根据不同的实验要求,添加量可以在1/100和1/10000之间。真核细胞所需的量高于原核细胞,因为真核细胞的核酸含量高,并且可以按照1/1000的比例添加真核细胞初始添加量,可以按照1/10000的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高,因此在4℃下消化的DNA添加比例高于室温下。普通的CoIP实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加,并且可以按照1/100的比例添加对DNA残基要求高的实验。

 

Q: 如何灭活全能核酸酶?如何移除?

A: EDTA螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性,极端条件下可以引起不可逆的失活,如100mM NaOH和70℃处理30min。可以通过阴离子交换柱或气相色谱法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性,建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。

 

Q: 储存条件

A: 储存温度为-20℃。储存缓冲液:20mM Tris-HCl pH 8.0,50mM NaCl,2mM MgCl2,50%甘油。

 

 

Q: 全能核酸酶应用

A:

1、蛋白质提取过程中核酸污染的去除:当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时,全能核酸酶可用于降低样品粘度,以便于操作;

2、有效减少储存的外周血单个细胞(PBMC)的聚集;

3、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备;

4、有效去除带负电荷核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响;

5、在宽范围的条件下(6M尿素、0.1M盐酸胍、0.4%Triton X100、0.1%SDS、1mM EDTA、1mM PMSF),降解所有形式的(双链、单链、线性、环状)DNA和RNA;

6、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序,去除蛋白质产品中的污染;

7、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用,去除粗提液中的核酸,降低溶液粘度,提高蛋白质产量。

 

义翘神州提供不同级别全能核酸酶,GMP级条件下生产的全能核酸酶SuperNuclease,无动物源性,可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性,应用场景广泛且使用量低不易残留,质量、性能、供货能力可靠,并已完成在FDA的药物主文件申报备案(DMF Number#:35978),满足药物申报的规范。

更多详情可以关注:https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit

 

  • 发表于 2023-10-25 14:37
  • 阅读 ( 1236 )
  • 分类:其他

你可能感兴趣的文章

相关问题

0 条评论

请先 登录 后评论
xiaoqin2023
xiaoqin2023

32 篇文章

作家榜 »

  1. omicsgene 701 文章
  2. 安生水 349 文章
  3. Daitoue 167 文章
  4. 生物女学霸 120 文章
  5. xun 82 文章
  6. 红橙子 78 文章
  7. rzx 75 文章
  8. CORNERSTONE 72 文章