细胞凋亡检测最火方法——Annexin V/PI双染法
凋亡(Apoptosis)，或者说程序性细胞死亡，是细胞内建的防御机制之一，在生物的正常发育及疾病抵御中起到重要的作用。
凋亡是个复杂的过程，至少有两种主要途径 – 内在和外在 – 导致了程序性细胞死亡。目前至少有十数种检测细胞凋亡的方法，从大框架上讲，可以划分为基于细胞形态、生物学功能和生化标记三大类。
然而，每一种方法都有其优缺点，本文我们来介绍目前最受欢迎的亡检测手段之一——Annexin V/PI双染法。
基本原理
细胞凋亡早期的特征之一是磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl—serine，PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。而人膜联蛋白V(AnnexinV)对PS具有特异的亲和作用，将Annexin V进行荧光素——FITC标记，作为一敏感的探针可检测暴露在细胞膜表面的PS，利用流式细胞仪或者荧光显微镜观察细胞凋亡现象。
这种方法不需要固定细胞，避免了因固定造成的假阳性等问题，结果亦更可靠，这是目前公认的灵敏、高效和成熟的凋亡细胞检测方法之一。
流式Annexin V系列凋亡试剂盒
正常细胞膜磷脂的分布是不对称的，膜内表面含负电的磷脂(如PS)。在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面。Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin V与PI、7-AAD等核染色液搭配使用，用流式细胞仪检测就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
Elabscience Annexin V系列凋亡试剂盒的产品优势
1、多种标记物(FITC、PE、APC、AF647/PI、7-AAD)选择，满足不同待测样本和检测仪器的需求;
2、多种试剂盒相关组分在售，灵活满足不同的实验需求;
3、检测早期凋亡最理想的方法，不需固定环节从而避免相关的假阳性;
4、只需15-20分钟，简单快捷;
5、严格可靠的质量控制，保证优异的实验结果;
6、专业的售前售后技术支持，可以更好完成凋亡实验。
Annexin V系列凋亡检测产品目录
Ø Annexin V荧光双染凋亡试剂盒
Ø Annexin V凋亡检测单品
Ø Annexin V蛋白
实验数据：Annexin V-FITC/PI检测试剂盒分群效果优异
Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h，Annexin V-FITC/PI检测试剂盒染色后FCM检测。Annexin V-FITC单阳为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，PI单阳细胞为裸核细胞。
流式检测细胞凋亡的数据分析方法：
1) 选中所有颗粒，将FSC和SSC设置成对数坐标轴模式备用;
2) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道(7-AAD与此类似)，选取双阴细胞群;
3) 在双阴细胞门中，将横轴和纵轴分别设成FCS和SSC，将数据呈现方式改为轮廓图，找到细胞碎片，划出碎片门，应用于所有细胞;
4) 在所有细胞中，反选碎片门，得到所有细胞;
5) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道，参照未经药物处理的对照组，划出十字门，确定不同群细胞的比例。
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- 发表于 2019-05-18 11:05
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- 分类：实验相关
