APE是一款序列分析软件,可以对序列进行酶切位点预测、序列比对、引物设计、DNA序列翻译等等,用途是十分广泛,APE软件小巧快速,操作简单,下面我们一起了解一下它的功能!
在进行克隆实验时,为了避免插入片段被酶切,所以尽量避免选择序列所包含的限制性内切酶,这时需要进行酶切位点预测,APE可以帮我们轻松完成!打开APE,点击File-new,将要分析的序列复制到对话框;或者点击open,打开下载的序列文件(fasta或者gb格式)。点击Enzymes,选择Enzymes select选项,如下图所示:
进入Enzymes select后,在内切酶列表中选择感兴趣的酶,选中会标红,如下图:
选择内切酶完毕后,列表下方点击Digest with all,即可完成酶切预测,结果如下图:
选中需要设计引物的序列,点击Tool中Find primer,软件默认引物长度为20—25nt、GC含量45-60%、Tm值55-60度,如下图,设计特异性引物非常方便!
引物设计结果如下,引物与序列关系是交互式的,引物前数字是引物起始位置:
打开两个序列文件,点击Tool中Align two sequence,可以对两个序列进行比对,其中不同序列部分会红色标注,序列差异一目了然。
APE软件还可以将序列直接与NCBI数据库中序列进行比对,选中要比对的序列,点击Tool工具中BLAST sequence at NCBI,软件自动打开NCBI比对页面,如下:
选中序列后,点击Tool中sgRNA,APE便会自动进行辅助设计CRISPR/CAS9引物,建议参考用!
选中序列后,点击CDS工具中Traslate或直接快捷键Ctrl+T,便可将选中序列翻译为蛋白质序列。以上是APE软件几个简单实用的功能,其实该软件还有很多其他功能,感兴趣的下载体验一下吧!
上图就是APE网站首页,点击下载安装即可,网址:https://jorgensen.biology.utah.edu/wayned/ape/
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