什么是siRNA ?
siRNA(small interfering RNA 小干扰RNA) 是由 20-25 个核苷酸组成的双链 RNA 分子。一般3’端有两个游离的碱基,通过RNA干扰途径沉默目标基因。
RNA干扰(RNAi)
在RNA干扰通路中,siRNA 通过与互补 mRNA 分子杂交干扰基因表达。这种干扰会触发 mRNA 降解,进而抑制特定基因的基因表达。
人工合成siRNA
siRNA 于 1999 年由 David Baulcomb 实验室首次发现。
2001 年,Thomas Tuschl 提出合成 siRNA 会在哺乳动物细胞中诱导 RNA 干扰 (RNAi)。
如今,专门设计用于与 RNA 靶序列杂交并使其降解的“合成”siRNA 寡核苷酸已被广泛用于诱导细胞 RNAi。靶 mRNA 的降解能够有效“敲除”相应蛋白质的表达。然后可研究分析靶蛋白浓度降低造成的影响。
siRNA 的作用原理:
将双链 RNA (dsRNA) 引入细胞。
细胞中的 Dicer 蛋白将 dsRNA 消化为 21 bp 的 dsRNA (siRNA)。
siRNA 被整合到 RNA 诱导沉默复合体 (RISC) 中。
在 RISC 复合体中,dsRNA 发生链分离。
其反义链与细胞中的互补/靶 mRNA 杂交。
活化 RISC 中的核酸酶降解靶 mRNA。
断裂的 mRNA 无法翻译成蛋白质。也就是说蛋白质无法表达,从而成功“敲除”蛋白质。
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