Pacbio 的测序原理与二代的边合成边测序原理有很大的不同。其在建库上就有很大的差别。 二代的测序文库是线性的,而三代的测序文库是环装的。
环装的文库,有很多的好处:
1. 环装结构,使得测序能一直测序下去,充分利用了三代测序的长读长特点
2. 一条序列,能被多次测到,提高了序列的重现性
3. 多次测到的序列能相互的校正序列,提高准确率
如上图所示,一个文库是有两个哑铃状的测序接头和中间的待测序列构成。
1. Polymerase Read: 是一个测序聚合酶,在一个环装文库分子上,一直读取的序列,一般会很长,可能对环装分子读取了多遍
2. Subreads: Polymerase Read 的序列中,去掉哑铃状的测序接头序列,即可以得到多条subreads 序列。
3. CCS(Circular Consensus Sequence): 环装一致性序列,是一个Polymerase read 上的多条subreads 序列,相互校正得到的一条反映真实文库的序列
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