转录组是一个很有效、简便、普遍的研究手段,具有材料要求低,实验设计简单,数据产生周期短等特点;但是很多人仍不知道该如何利用转录组技术去解决自己的科研问题,究其原因,无非是以下两种:
转录组数据结果似懂非懂,无法做到从海量结果数据里一层一层筛选出关键的研究结果。
转录组后续分析及实验无思路,无法完成整个科研闭环!
解决以上两个问题,一是要真正读懂转录组结果,要知其然更要知其所以然;二是要多读文献,而且是好文献吆!为此,组学大讲堂精心筹备了《转录组结果解读与挖掘精讲班》,让你深入理解转录组数据,掌握标准分析后的数据挖掘思路及技巧方法,彻底玩转转录组!具体课表见文末。
下面以一篇文章为例,来介绍一下别人是如何采用转录组测序技术,从大量数据到少量数据,层层筛选出自己关心的关键基因,并采用实验进行一定的验证,完成研究闭环的。
作者研究科学问题很明确:即小麦穗发育过程中不同时期基因时空表达。作者选择了穗发育6个时期,通过转录组测定这6个时期小麦穗中基因表达的变化情况及其调控机制。如下图,显示不同时期的麦穗的发育情况。
基于小麦穗发育的6个时期,分别采样并进行转录组测序,下面我们一起看一下作者是如何从海量数据里层层筛选的!
1. 首先针对测序数据结果,比较不同时期内,不同表达丰度基因的分布情况;并结合小麦基因组的ABD异源多倍体特点,分别统计基因在基因组(ABD)上分布,以及在不同时期的表达相关性,如下图:
2. 针对不同的发育时期,进行基因表达差异分析,筛选出差异表达的基因;下一步针对不同发育时期,构建K-means聚类,获得表达模式比较类似的基因集,如下图:
3. 针对差异表达的基因集,结合麦穗发育的机制,挑选生长素和细胞分裂素相关的基因,研究其表达模式,并用q-PCR验证。
4. 转录因子在植物的生长发育过程中起到关键的作用,作者分析了不同家族的转录因子在穗发育过程中的表达情况;并针对AP2 家族的转录因子进行q-PCR验证。
5. 结合已有的研究结果,针对穗发育过程中的一些关键的转录因子和基因进行q-PCR验证和原位杂交实验。
6. 物种发育具有一定的保守性,作者根据水稻中类似的研究,分析了本实验中同源基因的表达,发现与水稻中同源基因表达趋势一致。
首先作者研究目的非常明确,即研究小麦穗发育不同阶段基因的时空表达及调控机制;作者先分析不同发育阶段基因表达差异,了解基因表达模式。
接下来作者分别分析了激素(生长素、细胞分裂素)和关键转录因子对穗发育的调控作用,并对筛选的关键基因及转录组因子通过QPCR、原位杂交进行了验证。
最后作者还结合他人的研究数据,研究基因在水稻和小麦中表达调控的保守性,对自己结果进一步佐证。
总的来看,此文结构较为紧凑,脉络清晰,值得借鉴!
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