affymetrix表达谱芯片在设计时 除了全匹配(perfect match, pm) 探针(25-mer探针)进行进行荧光信号检测外,有时会设计错配(mismatch, mm) 探针(一个位点错配),基于PM-MM探针设计可以使检测低浓度靶序列的特异性和灵敏度大大提高,也便于进行背景校正等。而由于芯片原始数据处理的方法不同,有时会利用错配探针信号,而有时并不会参考错配探针信息。譬如,常见的 RMA算法进行数据标准化并未利用到mm信号值,mas5 方法则要参考mm进行计算。
因此在实际分析的过程中需要明确对应的affymetrix芯片 是不是包含两种探针信号,可选择的原始数据标准化的分析方法是不是相互配套。
分析过程中可以对读取的affymetrix芯片原始数据,所对应的AffyBatch 对象 利用pm() 函数和mm()查看是否包含对应的两种探针信号值。
以 GSE66196 数据为例 https://www.omicsclass.com/article/609
> PM=pm(AffyBatch)
> head(PM,1)
GSM1616746_Pool_1_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz GSM1616747_Pool_1_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz
369707 390 205
GSM1616748_Pool_1wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz GSM1616749_Pool_2_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz
369707 181 497
GSM1616750_Pool_2_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz GSM1616751_Pool_2wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz
369707 223 190
GSM1616752_Pool_3_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz GSM1616753_Pool_3_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz
369707 525 240
GSM1616754_Pool_3wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz GSM1616755_Pool_4_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz
369707 192 446
GSM1616756_Pool_4_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz GSM1616757_Pool_4wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz
369707 214 155
> MM=mm(AffyBatch)
> head(MM,1)
GSM1616746_Pool_1_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz GSM1616747_Pool_1_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz
370871 174 157
GSM1616748_Pool_1wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz GSM1616749_Pool_2_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz
370871 159 215
GSM1616750_Pool_2_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz GSM1616751_Pool_2wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz
370871 148 137
GSM1616752_Pool_3_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz GSM1616753_Pool_3_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz
370871 213 180
GSM1616754_Pool_3wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz GSM1616755_Pool_4_Hilscher_26-07-2012.CEL.gz
370871 152 234
GSM1616756_Pool_4_Reif-Hilscher_8-2-2012.CEL.gz GSM1616757_Pool_4wdh_Reif-Hilscher_9-2-2012.CEL.gz
370871 151 134
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