要提取外泌体做转录组或者蛋白组学测序时,如何检测分离出的外泌体?
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在外泌体研究中,外泌体鉴定是继分离之后的又一关键步骤。分离到的“外泌体”是否有较典型的外泌体结构?是否表达特异性的外泌体表面Marker?大小是否落在外泌体常规的粒径范围?这些都是外泌体研究所需要考虑的问题。一般情况下,研究者会综合运用各种检测手段来对分离物进行最终界定,而在这些手段中,外泌体透射电镜观察以及外泌体粒径分析(NTA)都是非常关键的技术。透射电镜借助由电子枪发射的电子通过样品后逐渐放大以及成像,直接观察外泌体的大小与结构,是外泌体表征鉴定方法的“金标准”。
NTA(Nanoparticle Tracking Analysis)技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一;采用Zetaview(品牌:Particle Metrix)进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA),原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析,结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。相较于其他表征方式,NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。
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